人增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒使用说明书

检测原理:试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)
。往预先包被PCNA抗原的包被微孔中




，依次加入标本


、标准品

、HRP标记的检测抗原
，经过温育并彻底洗涤
。用底物TMB显色
，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色
，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的增殖细胞核抗原抗体(PCNA)呈正相关
。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)





，计算样品浓度
。

样品收集、处理及保存方法
1. 血浆

：EDTA



、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
2. 血清

：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存


：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。

自备物品
1. 37℃恒温箱
2. 酶标仪(450nm)
3. 高精度加样器及枪头
：0.5-10uL、2-20uL
、20-200uL

、200-1000uL

操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃


，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶
，这属于正常现象

，水浴加热使结晶完全溶解后再使用




。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中
，密封(低温干燥)保存

。3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白
；按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，最终结果乘以5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间

、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。